تخلیص نسبی آنزیم آلژینات لیاز تولید شده از یک سویه موکوئیدی باکتری pseudomonas aeruginosa جداشده از بیمار

thesis
abstract

باکتری pseudomonas aeruginosa، یک باکتری گرم منفی، هوازی و میله ای شکل متعلق به خانواده pseudomonadaceae می باشد.. این باکتری به دلیل توانایی بالا در تولید پوشش موکوئیدی حاوی اگزوپلی ساکاریدی به نام آلژینات، عامل اصلی مزمن شدن عفونت مجاری تنفسی و در نتیجه مرگ و میر در بیماران مبتلا به فیبروز سیستیک به شمار می آید. یکی از آنزیم های مهم در تولید و تجزیه آلژینات، آلژینات لیاز (algl) نامیده می شود. در این پژوهش هدف، استخراج و تخلیص نسبی آنزیم algl ، تعیین برخی ویژگی های آن و همچنین بررسی اثر آن روی آلژینات جدا شده ازp. aeruginosa 8821m می باشد. در این پژوهش آنزیم algl، از باکتری p. aeruginosa جدا شده از خلط بیمار تنفسی استفاده شد. این آنزیم در فضای پری پلاسمیک باکتری وجود دارد و با روش شوک حرارتی استخراج گردید. میزان فعالیت آنزیم به وسیله روش تیوباربیتوریک اسید (tba) سنجیده شد. اثر زمان های مختلف در معرض گذاری سوبسترا و آنزیم، غلظت سوبسترا، ph و دما بر فعالیت آنزیم بررسی گردید. همچنین پایداری گرمایی (فعالیت باقیمانده) آنزیم در دماهای 37 تا 80 درجه سانتی گراد بررسیشد. نتایج نشان داد که این آنزیم در غلظت 4/0 میلی گرم بر میلی لیتر سوبسترا، در زمان 20 دقیقه در معرض گذاری با سوبسترا، در دمای 37 درجه سانتی گرادو ph 5/8 بیشترین فعالیت را دارد. همچنین آنزیم در دمای 37 درجه سانتی گراد بیشترین پایداری دمایی را نشان داد. به دلیل مقاومت گرمایی بالای آنزیم algl در دمای 80 درجه سانتیگراد، آنزیم در ساعت های مختلفی در دمای 80 درجه سانتیگراد گرماگذاری شد و بعد از 4 ساعت هنوز 33/31% فعالیت داشت. این آنزیم علاوه بر تاثیر بر آلژینات جلبکی بر آلژینات باکتریایی موثر است که بسیار مهم می باشد. برای تخلیص آنزیم alglاز روش رسوبگذاری با نمک آمونیوم سولفات و کروماتوگرافی ستونی تعویض یونی deaesepharose cl-6b استفاده شد و سپس آنزیم روی ژل الکتروفورز حاوی sds برده شد. در روش رسوبگذاری با نمک آمونیوم سولفات آنزیم در غلظت 50% از نمک آمونیوم سولفات رسوب کرد. آنزیم به ستون متصل شد و در غلظت 1/0 مولار از نمک nacl از ستون جدا گردید. وزن مولکولی آنزیم حدود 60 کیلو دالتون تخمین زده شد. آنزیم algl بررسی شده به دلیل مقاومت گرمایی بالا و تاثیرگذاری روی آلژینات های استیله باکتریایی بسیار مهم می باشد و می تواند در تخریب بیوفیلم های ایجاد شده به وسیله سویه های موکوئیدی pseudomonas به کار رود.

First 15 pages

Signup for downloading 15 first pages

Already have an account?login

similar resources

تخلیص آنزیم آلژینات لیاز از یک باکتری تخریب کننده آلژینات

pseudomonas aeruginosa باکتری بیماری زای فرصت طلبی است که عامل عفونت های متنوعی در بیماران با سیستم ایمنی تضعیف شده است. تواناییp.aeruginosa در ایجاد عفونت های مزمن مرتبط با بیوسنتز آلژینات است که پلیمری پلی ساکاریدی متشکل از واحد های ?-d-mannuronic acid با پیوند های 1به 4 می باشد که با واحد های ?-l-guluronic acid در آن پراکنده شده است. آلژینات می تواند انتشار آنتی بیوتیک های مشخصی را به سلول م...

15 صفحه اول

جداسازی و تخلیص آلژینات لیاز پایدار حرارتی موثر بر آلژینات Pseudomonas aeruginosa بیمارستانی

آلژینات لیازباکتریایی آنزیمی پری پلاسمی است که در تولید و تخریب آلژینات اهمیت دارد. خصوصیات این آنزیم اعم از وزن مولکولی، pI، مقاومت حرارتی، pH و دمای بهینه و تاثیر بر آلژینات باکتریایی در سویه های یک باکتری هم متفاوت می باشد. در این مطالعه، به منظور دسترسی به آلژینات لیازی با خصوصیات ویژه و کار آمد در تخریب آلژینات باکتریایی، ازجدایه موکوئیدی Pseudomonas aeruginosa به دست آمده از خلط بیمار...

full text

جداسازی و تخلیص آلژینات لیاز پایدار حرارتی موثر بر آلژینات pseudomonas aeruginosa بیمارستانی

آلژینات لیازباکتریایی آنزیمی پری پلاسمی است که در تولید و تخریب آلژینات اهمیت دارد. خصوصیات این آنزیم اعم از وزن مولکولی، pi، مقاومت حرارتی، ph و دمای بهینه و تاثیر بر آلژینات باکتریایی در سویه های یک باکتری هم متفاوت می باشد. در این مطالعه، به منظور دسترسی به آلژینات لیازی با خصوصیات ویژه و کار آمد در تخریب آلژینات باکتریایی، ازجدایه موکوئیدی pseudomonas aeruginosa به دست آمده از خلط بیمار مبت...

full text

بررسی اثر آنزیم آلژینات لیاز بر روی بیوفیلم pseudomonas aeruginosa بیمارستانی و تعیین خصوصیات ژن آنزیم

pseudomonas aeruginosa یک باکتری گرم منفی، هوازی، میله ای شکل است که دارای دو فنوتیپ موکوئیدی و غیر موکوئیدی است. سویه های موکوئیدی پلیمر آلژینات تولید می کنند که عامل اصلی مزمن شدن عفونت های حاصل از p.aeruginosa می باشد که با تشکیل بیوفیلم، مقاومت بالایی در برابر آنتی بیوتیک ها از خود نشان می دهند. آنزیم آلژینات لیاز توانایی تولید و تجزیه ی آلژینات را دارا می باشد بنابراین تجزیه ی زیستی بیوفیل...

تولید و تخلیص نسبی Streptavidin از محیط کشت باکتری توسط کروماتوگرافی تعویض یونی بوسیله DEAE - سلولز

full text

ارزیابی اثر هم افزایی آنزیم آلژینات لیاز نوترکیب باکتریایی و آنتی بیوتیک های رایج درمانی بر رشد سلول های پلانکتونی سودوموناس آئروجینوسا

سابقه و هدف: باکتری سودوموناس آئروجینوسا پاتوژن فرصت طلبی است که آلژینات، یکی از مهمترین فاکتور های بیماری زایی این باکتری محسوب می شود. این مطالعه با هدف سنجش اثر هم افزایی آلژینات لیاز نوترکیب باکتریایی و آنتی بیوتیک های رایج در درمان عفونت های سودوموناسی بر رشدسلول های پلانکتونی سودوموناس آئروجینوساانجام شد. مواد و روش ها: در مط...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه الزهراء - دانشکده علوم پایه

Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023